سلامة الخلايا اللحمية الوسيطة البشرية المشتقة من الحبل السري وفعاليتها في إصلاح القيلة النخاعية السحائية لدى أجنة الأغنام

النقاط الرئيسة والنتائج:

أُجريت هذه الدراسة ما قبل السريرية على أجنة الأغنام، ولم يُعالج فيها أي طفل. يُعد فريق فرنسي في باريس برنامجًا للجراحة الجنينية يضيف الخلايا اللحمية الوسيطة المشتقة من الحبل السري (UC-MSCs) إلى الإصلاح قبل الولادة للقيلة النخاعية السحائية. وتعرض الورقة أول اختبار لهم لخلايا UC-MSC البشرية، وهي نوع خلايا مستخدم على نطاق واسع في العلاج الخلوي السريري، موضوعةً على الحبل الشوكي لأجنة الحملان.

كان الحبل الشوكي لدى الحملان التي تلقت الخلايا محفوظًا بصورة أفضل في الفحص النسيجي، وكان الفرق دالًا إحصائيًا. كما مالت حركتها إلى أن تكون أفضل، مع أن نتائج الحركة لم تبلغ الدلالة الإحصائية. ولم يولد حيًا سوى تسعة حملان، دُرست 24 ساعة. وفُقد نحو نصف الأجنة التي أُجريت لها الجراحة. ويذكر المؤلفون أن النقل إلى البشر يجب أن ينتظر بيانات حيوانية أطول أمدًا.

الهدف:

تقييم سلامة رقعة من الفيبرين تحتوي على خلايا UC-MSC بشرية وفعاليتها، مستخدمةً إضافةً إلى الإصلاح الجراحي الجنيني للقيلة النخاعية السحائية في نموذج الأغنام.

الطرق:

عُزلت خلايا UC-MSC بطريقة الزرع النسيجي من ثلاثة حبال سرية بشرية، تبرعت بها نساء بموافقتهن بعد ولادة مهبلية. واستوفت الخلايا تعريف الجمعية الدولية للعلاج الخلوي. فكانت تلتصق بالبلاستيك ومغزلية الشكل، إيجابية لـCD73 وCD90 وCD105، وسلبية لـCD45 وCD11b وCD14 وCD34 وCD79a.

صُنعت الرقعة في اليوم السابق للجراحة من عدة تجارية لمانع التسرب الفيبريني (Evicel). وللرقعة الخلوية، مُزج 17 مليون خلية UC-MSC في التمرير 5 بمحلول الفيبرينوجين قبل تخثيره بالثرومبين في طبق. وكانت رقع الضبط مطابقة لكنها لا تحتوي على خلايا. وفي التصوير المجهري المتتابع زمنيًا تحركت الخلايا بحرية عبر الرقعة واتخذت شكلها المغزلي الطبيعي خلال 72 ساعة.

أُحدث عيب شوكي جراحيًا لدى أجنة الحملان في اليوم 75 من الحمل (استئصال الصفيحة الفقرية من L1 إلى L5 مع إزالة الأم الجافية). وأُصلح بعد 14 يومًا، في اليوم 89، حين وُضعت الرقعة على الحبل الشوكي وأُغلق جلد الجنين فوقها. وفُحصت النعاج يوميًا للحالة العامة والحرارة والتئام الجرح. ووُلدت الحملان بعملية قيصرية في اليوم 142.

قيّم طبيب بيطري معمّى عن نوع الرقعة الحركة عند ساعتين و24 ساعة من العمر باستخدام مقياس Sheep Locomotor Rating ‏(0 يعني شللًا سفليًا تامًا، و15 يعني طبيعيًا). ثم قُتلت الحملان رحيمًا. وفُحصت جميع الأعضاء الرئيسة بالعين وتحت المجهر بحثًا عن أورام. وعند مستوى L3-L4 من الإصلاح قاس الفريق مساحة الحبل الشوكي ومساحة المادة الرمادية وعدد الخلايا العصبية الكبيرة (العصبونات الحركية) لكل مليمتر مربع من المادة الرمادية وسماكة النسيج الندبي. وقورنت المجموعات باختبار Mann-Whitney U.

النتائج:

أُحدث عيب لدى 17 جنينًا. مات اثنان داخل الرحم قبل الإصلاح، فأُصلح 15، منها 8 برقعة خلوية و7 برقعة ضبط. وبعد الإصلاح فُقد 2 من 8 في مجموعة الخلايا و4 من 7 في مجموعة الضبط. وبلغ الفقد الجنيني الإجمالي 47% (8 من 17). وإجمالًا وُلد 9 حملان أحياء، 6 مع خلايا و3 من مجموعة الضبط.

السلامة: لم تُصب أي نعجة بالحمى أو أي مضاعفة أخرى، ولم تظهر علامة على رفض الخلايا البشرية. والتأم الإصلاح تمامًا لدى الحملان التسعة جميعًا، دون تسرب للسائل الدماغي الشوكي ودون عدوى. ولم يُعثر على ورم لدى أي حمل في الفحص السريري أو في أي عضو، بعد 54 يومًا من وضع الخلايا. ولم يكن لدى أي حمل انفتاق الدماغ المؤخر.

الحركة:

• الدرجة الحركية عند ساعتين: الوسيط 4.0 (المدى 0 إلى 13) مع الخلايا مقابل 2.0 (0 إلى 5) دونها، p = 0.32.
• الدرجة الحركية عند 24 ساعة: الوسيط 15.0 (المدى 2 إلى 15) مع الخلايا مقابل 2.0 (2 إلى 5) دونها، p = 0.07.
• القدرة على الوقوف دون مساعدة: 3 من 5 مع الخلايا، و0 من 3 دونها، p = 0.08.
• هزال العضلات: 1 من 6 مع الخلايا، و2 من 3 دونها، p = 0.13.

لا يبلغ أي من هذه الفروق العتبة المعتادة p أقل من 0.05. وأحرز حمل معالَج واحد على الأقل 2 فقط، وهذا ليس أفضل من حملان الضبط.

الحبل الشوكي تحت المجهر:

• كثافة الخلايا العصبية الكبيرة: 9.9 لكل مم² من المادة الرمادية مع الخلايا مقابل 6.3 دونها (p = 0.04).
• مساحة المادة الرمادية: 6.2 مقابل 1.9 مم² (p = 0.01).
• مساحة الحبل الشوكي: 16.1 مقابل 7.5 مم² (p = 0.02).
• سماكة الندبة حول الحبل: 70.9 مقابل 253.7 ميكرومترًا (p = 0.10). وسماكة الندبة في موضع الإصلاح: 691.3 مقابل 1,684.4 ميكرومترًا (p = 0.18). وكانت كلتاهما أقل مع الخلايا، دون بلوغ الدلالة.

يصف الملخص الدرجات الحركية بأنها متوسطات. أما جدول النتائج في متن الورقة فيصنفها وسيطات مع المدى، وهذا يتوافق أيضًا مع الاختبار الإحصائي المستخدم. ويتبع هذا الملخص الجدول.

الاستنتاجات:

يخلص المؤلفون إلى أن خلايا UC-MSC البشرية المستخدمة مع الجراحة الجنينية للقيلة النخاعية السحائية كانت آمنة لدى الأغنام، وأن الخلايا تبدو كأنها تعمل من خلال المواد التي تفرزها لا بالتحول إلى نسيج عصبي أو الانتشار في الجسم، وأن الاستخدام لدى البشر “سيُنظر فيه بعد تأكيد نتائج السلامة هذه على مدى فترة أطول في النموذج الحيواني”.

القيود التي يذكرها المؤلفون:

• أعداد صغيرة في كل مجموعة، مع نقص محتمل في القوة الإحصائية.
• معدل فقد جنيني مرتفع، وإن كان مماثلًا لجراحات جنينية أخرى على الحيوانات الكبيرة. ففي مراجعة لـ232 حملًا من المجموعة الأمريكية الرائدة، لم يتجاوز البقاء 43%.
• تعذر إبقاء الحملان حية بعد 24 ساعة لأسباب مالية، فلا يُعرف شيء عن السلامة أو الوظيفة على المدى المتوسط أو الطويل. وتجري دراسة متابعة عند شهر و6 أشهر من العمر.
• كانت الفائدة أصغر منها في تجارب الفريق السابقة بخلايا UC-MSC من الأغنام. ويشتبهون في التفاوت بين المتبرعين، إذ ربما لم تكن الحبال الثلاثة المستخدمة منتجة قوية للعوامل الحامية. ويختبرون علاجين لذلك، هما تجميع الخلايا من عدة متبرعين واختبار فاعلية لاختيار المتبرعين ذوي الإفراز المرتفع.

معلومات أساسية:

يشير المؤلفون إلى أنه حتى بعد الجراحة الجنينية لا يستطيع 71% من الأطفال المشي باستقلالية في سن الثامنة، ويحتاج 75% إلى قثطرة بولية يومية في سن العاشرة. لذلك تضيف عدة مجموعات خلايا إلى العملية. وقد بدأت مجموعة من كاليفورنيا تستخدم خلايا مشتقة من المشيمة تجربة بشرية. وتقول المجموعة الفرنسية إنها الوحيدة التي تستخدم خلايا الحبل السري.

في العمل المختبري للفريق، تفرز خلايا UC-MSC البشرية العامل التغذوي العصبي المشتق من الدماغ وعامل نمو الخلايا الكبدية، اللذين يحميان الخلايا العصبية، إضافة إلى عوامل مضادة للتندب. وفي دراسة تتبع سابقة باستخدام خلايا متألقة، لم تنتقل الخلايا المزروعة إلى أعضاء بعيدة.

لسلامة الاستخدام لدى البشر، يشير المؤلفون إلى تحليلين تلويين كبيرين لتجارب عشوائية لخلايا UC-MSC في حالات أخرى، أُعطيت في الغالب وريديًا لبالغين وأطفال، كانت فيهما الحمى العابرة الحدث السلبي الوحيد المرتبط بالخلايا ولم يُبلغ عن أورام. ولا تأتي أي من تلك البيانات من الاستخدام لدى جنين، وهو ما يقر المؤلفون بأنه لم يُدرس قط لخلايا UC-MSC.